颅骨作为高度精密调控的组织，其发育与再生过程受严格分子调控。颅骨干细胞的命运决定及向成骨细胞谱系的定向分化，对颅骨正常发育与损伤修复至关重要。然而，颅骨干细胞如何精确调控颅骨发育与再生的分子机制，一直是科学界亟待解决的关键问题。

2025年3月12日，浙江理工大学陈贵钱课题组在国际权威期刊《自然-通讯》（Nature Communications，影响因子14.7）发表题为“Nf2-FAK signaling axis is critical for cranial bone ossification and regeneration”的重要研究成果。该研究揭示Nf2-FAK信号轴在颅骨干细胞命运决定及颅骨发育与再生中的核心调控作用。

研究团队通过高通量测序筛选新靶点，结合条件性基因敲除小鼠模型，发现Nf2基因在颅骨组织中特异性高表达。课题组通过构建颅骨缺损小鼠模型，结合诱导性基因敲除和R26-Tomato细胞示踪技术，发现Nf2缺失显著延缓颅骨缺损再生进程，并抑制迁移至损伤部位的颅缝干细胞的增殖潜能。接着做了体外细胞实验，通过慢病毒过表达、Co-IP及NanoBiT活细胞蛋白互作实验，证实Nf2作为FAK的上游调控因子，与其直接互作，并通过PI3K/Akt和Erk1/2信号通路调控细胞功能。

这一研究揭示了Nf2-FAK信号轴在骨发育与再生中的核心调控作用，为颅骨缺损再生的临床干预提供了新靶点和新策略，具有重要的临床转化潜力。

文中，研究者用NanoBRET™Nano-Glo®Detection System 试剂盒定量评估 Nf2 和 FAK 在活细胞中的动态相互作用。NanoBRET™系统是一种生物发光共振能量转移，它是基于蛋白接近度的检测技术，通过测量从生物发光蛋白供体至荧光蛋白受体的能量转移来检测蛋白间的相互作用。如图1所示，Large BiT（LgBiT；17.6kDa）和 Small BiT（SmBiT；11 个氨基酸）亚基分别与目的蛋白融合，当A蛋白表达时，蛋白相互作用会使这两种亚基极为靠近从而发出明亮发光信号。

图1

信号检测采用Varioskan LUX (Thermofisher)，配备有适当滤光片的能够依次测量双滤光片发光检测功能，使用以下设置：

总测量时间：1000ms

测量供体信号滤光片：发射波长 450nm/BP 80nm

测量受体信号滤光片：发射波长 610nm/LP

结果表明，在小鼠成骨细胞MC3T3-E1中，Nf2-C末端小亚基结构域与FAK-N末端的大亚基结构域相互作用。且Nf2-FAK的生物发光率约为阴性对照组的37.6倍，明显大于活性蛋白的定义：蛋白质相互作用阈值（约10倍）（p=0.0001，n=3）（图2）。

图2

Thermo Scientific™ Varioskan™ LUX 多功能酶标仪可实现多种测定，包括吸光度测定、荧光强度测定、化学发光测定、AlphaScreen 测定和时间分辨荧光测定技术，专为满足生物科学研究人员的各种需求而设计。该仪器具备智能化的自动增益条件功能，简化了测量时的设置，其智能安全控件简化了工作流程并且有助于避免实验误差。Varioskan LUX 提高了多功能酶标仪可靠性和易用性标准，最大限度的满足了研究人员的需要。